Stabilization of a recombinant human epidermal growth factor parenteral formulation through freeze-drying.

Development studies were performed to design a pharmaceutical composition that allows the stabilization of a parenteral rhEGF formulation in a lyophilized dosage form. Unannealed and annealed drying protocols were tested for excipients screening. Freeze-dry microscopy was used as criterion for excipients and formulation selection; as well as to define freeze-drying parameters. Excipients screening were evaluated through their effect on freeze-drying recovery and dried product stability at 50 °C by using a comprehensive set of analytical techniques assessing the chemical stability, protein conformation and bioactivity. The highest stability of rhEGF during freeze-drying was achieved by the addition of sucrose or trehalose. After storing the dried product at 50 °C, the highest stability was achieved by the addition of dextran, sucrose, trehalose or raffinose. The selected formulation mixture of sucrose and dextran could prevent protein degradation during the freeze-drying and delivery processes. The degradation rate assessed by RP-HPLC could decrease 100 times at 37 °C and 70 times at 50 °C in dried with respect to aqueous formulation. These results indicate that the freeze-dried formulation represents an appropriate technical solution for stabilizing rhEGF.

Establecimiento de un material de referencia de trabajo para interleucina-2 recombinante / Establishment of a working reference material for recombinant interleukin-2

La interleucina-2 es una glicoproteína humana de 133 aminoácidos que resulta vital para obtener una respuesta inmunológica efectiva. En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología ha podido obtenerse por vía recombinante a partir de una cepa de Escherichia coli. Para el control de la calidad de cada lote producido se hizo necesaria la elaboración de un material de referencia de trabajo. En esta publicación se describen los pasos seguidos en la obtención del lote candidato y la preparación del material de referencia como tal. Se demostró que el patrón de trabajo preparado es homogéneo para el uso en las técnicas analíticas de control de calidad de la interleucina-2 y se predijo una pérdida de actividad inferior al 5 por ciento anual mediante un estudio de estabilidad acelerada. Se obtuvieron valores adecuados para la pureza del material de referencia, evaluada por electroforesis y para la actividad biológica, que se estableció con trazabilidad al material de referencia internacional para este producto

Establecimiento de un material de referencia de trabajo para interleucina-2 recombinante / Establishment of a working reference material for recombinant interleukin-2

La interleucina-2 es una glicoproteína humana de 133 aminoácidos que resulta vital para obtener una respuesta inmunológica efectiva. En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología ha podido obtenerse por vía recombinante a partir de una cepa de Escherichia coli. Para el control de la calidad de cada lote producido se hizo necesaria la elaboración de un material de referencia de trabajo. En esta publicación se describen los pasos seguidos en la obtención del lote candidato y la preparación del material de referencia como tal. Se demostró que el patrón de trabajo preparado es homogéneo para el uso en las técnicas analíticas de control de calidad de la interleucina-2 y se predijo una pérdida de actividad inferior al 5 por ciento anual mediante un estudio de estabilidad acelerada. Se obtuvieron valores adecuados para la pureza del material de referencia, evaluada por electroforesis y para la actividad biológica, que se estableció con trazabilidad al material de referencia internacional para este producto(AU)

Stability of Ala 125 recombinant human interleukin-2 in solution.

Herein, we describe the preformulation study of Ala 125- recombinant human interleukin-2 (rhIL-2A(125)) in solution. This modified form of the natural human IL-2 is obtained by the replacement of cysteine with alanine at position 125. The compatibility of this rhIL-2A(125) with type I borosilicate glass vials showed no significant adsorption at liquid-vial interface. The effect of single excipients on the stability of this lymphokine was evaluated through RP-HPLC, SDS-PAGE and biological activity assay. Polysorbate 80 at high concentrations decreased the stability of rhIL-2A(125) in solution. On the other hand, the use of antioxidants (methionine and EDTA Na(2)) diminished the oxidation rate of the active ingredient. Additionally, a group of amino acids (glutamine, alanine, glycine and histidine) stabilized rhIL-2A(125) in different grades, and glycine at 5 mg mL(-1) allowed for the best stability behaviour. Taken together, these preformulation results can be used to design an adequate liquid vehicle for rhIL-2A(125) to be manufactured for human use.

Expresión de receptores para el interferon alfa en lineas celulares procedentes de tumores humanos: relación con el efecto antiproliferativo / Alpha interferon (IFN) membrane receptor expresion was studied in human tumor cell lines

Se analizó la expresión de receptores de membrana para el interferón (IFN) alfa en cuatro líneas celulares procedentes de tumores humanos de diferentes orígenes como linfoma de Burkitt (células Daudi), adenocarcinoma de cervix (células HeLa), carcinoma de laringe (células HEp-2) y glioblastoma grado III-IV (células GL-5). El número de receptores expresados por células en cada caso no fue indicativo de la sensibilidad al efecto citostático del IFN alfa-2b. Sin embargo, el análisis de la afinidad del complejo IFN receptor según el procedimiento de Scatchard, mostró una correspondencia con dicho efecto. Las células Daudi, que expresaron alrededor de 1927 receptores por células con una alta afinidad (Kd=3.30x10-10M) resultaron ser las células sensibles al efecto antiproliferativo del IFN alfa-2b observándose una inhbición del crecimiento celular de alrededor del 30 por ciento en presencia de solamente 1.6pg/ml de la sustancia. Las células HeLa, que expresaron una mezcla de receptores de alta (Kd=3.36x10-10M) y de baja afinidad (Kd=3.21x10-9M) también fueron sensibles al efecto antiproliferatico del IFN alfa-2b aunque en un menor grado cuando se comparó con el observado en células Daudi. En cambio, las células HEp-2 y GL-5 mostraron una sensibilidad muy limitada al efecto del IFN alfa-2b y expresaron receptores de afinidad baja (Kd=1.20x10-8M y KD=8.33x10-9M respectivamente). Por otra parte, losensayos de unión del IFN alfa-2b a linfocitos de sangre periferica de ocho individuos sanos arrojó un valor promedio de 433ñ166 receptores por célula y una Kd=3.68 2.66x10-10M, los cuales fueron usados como referencia de unión de este IFN a células normales y altamente diferenciadas. Estos resultados apoyan evidencias experimentales anteriores las cuales demuestran que la presencia del receptor de IFN per se no es predictivo en cuanto a sensibilidad a determinados efectos biológicos del mismo mientras que otros parámetros como la afinidad del complejo IFN-receptor si pudiera aportar algún valor pronóstico en cuanto a la sensibilidad al efecto citostático del IFN.